精彩文章推荐2015年01期应用
摘要
目的
介绍多重连接依赖性探针扩增(multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA)技术在遗传性压力敏感性周围神经病(hereditaryneuropathywithliabilitytopressurepalsies，HNPP)患者基因诊断中的应用。
方法
应用MLPA技术检测8例临床拟诊为HNPP患者及5名健康对照者的周围髓鞘蛋白22(peripheralmyelinprotein22，PMP22)基因、筑丝蛋白3基因及细胞色素c氧化酶组装蛋白10(cytochromecoxidaseassemblyprotein10，COX10)基因外显子拷贝数。
结果
7例临床拟诊的HNPP患者所检测的PMP22基因、筑丝蛋白3基因及COX10基因各外显子峰面积较健康对照明显减低，各基因的拷贝数为1，提示为大片段杂合缺失；另1例临床拟诊的HNPP患者所检测的PMP22基因、筑丝蛋白3基因及COX10基因峰面积正常，各基因拷贝数为2，未发现杂合缺失。
结论
MLPA技术能快速、准确地对HNPP患者的HNPP相关基因进行定量分析，可用于HNPP患者的快速基因诊断。
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遗传性压力敏感性周围神经病(hereditaryneuropathywithliabilitytopressurepalsies，HNPP)是一种常染色体显性遗传的周围神经病。其人群患病率在国内尚缺乏相关流行病学资料，芬兰西南部的流行病学调查显示人群患病率约16/[1]。该病临床表现为易卡压神经分布区域反复发作的运动及感觉障碍，常与周围神经长期压迫和轻微损伤相关，神经电生理检查具有弥漫性周围神经传导异常，周围神经活体组织检查(简称活检)常可见典型的腊肠样结构。在遗传学上，其致病基因为定位于染色体17p11.2区域上的周围髓鞘蛋白22(peripheralmyelinprotein22，PMP22)基因。约85%的HNPP患者是因为该区域包含了PMP22基因的1.5Mb大片段缺失致病[2]。由此，可通过检测HNPP患者该大片段上基因拷贝数变异来进行基因诊断。
多重连接依赖性探针扩增(multiplexligation-dependentprobeamplification，MLPA)是一种新兴的基因半定量分析技术，通过利用多重连接依赖性探针可以同时检测多个目的基因的各外显子。我们采用MLPA技术对位于17p11.2区域1.5Mb大片段上的PMP22基因、筑丝蛋白3基因及细胞色素c氧化酶组装蛋白10(cytochromecoxidaseassemblyprotein10，COX10)基因进行拷贝数分析，根据其基因拷贝数对HNPP患者进行快速基因诊断。
资料和方法
一、研究对象
本研究的研究对象为福建医院年3月至年8月收集的8例临床拟诊为HNPP患者。入组标准参考国际HNPP诊断指南[3]以及Andersson等[4]提出的电生理诊断标准。入组的8例患者临床上拟诊为HNPP，其中男性6例，女性2例，年龄13～54(32.3±15.9)岁。4例患者有阳性家族史，分别来自2个家系(图1)。选取5名体检者为健康对照，均无肢体运动或感觉障碍，无遗传病家族史。本研究获得福建医院伦理委员会的批准，所有成员均签署知情同意书，自愿参与本研究。
图1
2个遗传性压力敏感性周围神经病家系系谱
二、实验方法
1．基因组DNA抽提：
8例入组患者及5名健康者均采集外周静脉血2ml，EDTA抗凝。采用QIAamp?DNA抽提试剂盒(QIAGEN公司，德国)，严格按照说明书操作提取基因组DNA。
2．MLPA分析：
采用MLPAP检测试剂盒(MRC-Holland公司，荷兰)进行分析，该试剂盒共包含42对探针，特异性检测位于17p11.2区域1.5Mb大片段上的PMP22基因、筑丝蛋白3基因和COX10基因，此外还包括了10对内对照探针。DNA样品定量后，先后经过杂交、连接、扩增等步骤进行反应，反应产物通过毛细管凝胶电泳(ABI基因分析仪)进行片段分离，进一步采用Genemapper3.0软件导出图形和数据，并用Excel软件对PMP22基因、TEKT3基因及COX10基因各外显子拷贝数进行分析，具体操作步骤参见产品说明书(白癜风可以治疗吗北京哪里有治白癜风的医院
