鼠尾胶原细胞的松软席梦思
胶原蛋白是结缔组织和内脏器官细胞外基质的主要构造成分，在皮肤、肌腱、骨骼中分布最为广泛。从遗传和结构上胶原蛋白分为许多类型。胶原蛋白I（Collagen,TypeI）是由2个α1链和1个α2链组成的异源多聚体（图1），在37℃，中性pH下自发形成三螺旋骨架，是一种优秀的细胞培养用基质，广泛用于肝细胞、成纤维细胞、脊神经节、肌肉细胞、施万细胞、胚肺细胞、上皮细胞和其他大量细胞系。还能用于研究细胞生长、分化、迁移以及发育过程中的组织形态发生。
图1胶原蛋白I分子模型
鼠尾胶原蛋白I是根据Birkedal-Hansen方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备。可用于包被细胞培养器皿，培养细胞表面粘附性，特别适合那些在普通培养器皿表面不易贴壁的细胞，比如成纤维细胞、肝细胞等原代细胞。还可用于三维胶的制备，模拟真实的生长环境，使得细胞在三维环境中生长。
本品为溶于6mMHAc的无菌溶液（图2），浓度5mg/ml，每个批次产品皆通过细胞培养测试（包括三维空间培养）以保证质量的可靠性。接下来我们了解鼠尾胶原蛋白I的两种用途吧。
图2鼠尾胶原蛋白I(abs)
一、细胞培养器皿的表面包被
组织培养器皿的表面包被推荐浓度为1-5μg/cm2，起始浓度可首选5μg/cm2。建议根据具体细胞类型来优化。
1、6mMHAc稀释液的制备
本品以溶于6mMHAc（=0.36g/LHAc）的无菌溶液形式提供，本身不溶于中性pH，建议用6mMHAc溶液做进一步稀释。配制方法：取34.5μl冰醋酸（17.4M）加入ml双蒸水，充分混匀后即得到6mMHAc溶液，0.22μm滤膜过滤除菌后待用。
2、包被步骤1）根据自身实验体系以及优化后的包被浓度来计算所需的胶原蛋白量，并加入相应孔内，确保胶原蛋白溶液完全覆盖表面。
a.以包被浓度为5μg/cm2，先用6mMHAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如50μg/ml，然后参考表1不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；b.以包被浓度为2μg/cm2，先用6mMHAc稀释液将胶原蛋白（5mg/ml）稀释到合适的中间浓度，如12μg/ml，然后参考表1不同培养皿内胶原蛋白加量表来加量到各孔内；
表1不同培养皿内胶原蛋白加量表
2）室温孵育1h，小心吸掉多余液体，用无菌PBS清洗3~4次后直接使用。或者加完胶原蛋白溶液后，在超净台内开盖过夜晾干。无菌条件下，包被好的器皿在4-25°C至少可保存3个月。
二、三维胶原的制备
当鼠尾胶原蛋白I使用浓度1mg/ml，pH7.0左右皆可形成具有一定强度的三维胶，建议成胶浓度为1-2mg/ml。
由于本品是以溶于6mMHAc的无菌溶液形式提供，在成胶过程需先加入0.06倍体积的0.1MNaOH中和。
1、需要溶液准备（无菌、预冷）
10×细胞培养液（依据培养的细胞种类而定）、0.1MNaOH、无菌水（abs）
2、三维胶原制备（不含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：1）取μl胶原蛋白（5mg/ml）加到置于冰浴的离心管内，加入μl无菌水。之后加到12μl0.1MNaOH，立即混匀。再加入μl10×细胞培养液，混匀后立即加到培养器皿中。。2）将培养器皿在室温（25°C左右）放置20min待胶凝固后，转移到培养箱内。三维胶原制备（含细胞）（以配制1ml，1mg/ml三维胶为例）：a.准备好细胞悬液，并放置于冰浴中。b，将μl胶原蛋白（5mg/ml）加到12μl0.1MNaOH，立即混匀。再加入23μl10×细胞培养液，立即混匀。再加入μl的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。
b.将培养器皿在室温（25°C左右）放置20min待胶凝固后，加入适当体积细胞培养液，转移到培养箱中培养。
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