抑制Rac1表达对高糖诱发神经元损伤后线
赵敏溪陶媛媛周婉晴胡婕刘卓懿夏萍萍王锷郭曲练叶治
病院麻醉科，长沙
国际麻醉学与苏醒杂志,,43(06):-.
DOI：10./cma.j.cn--
基金项目
国度当然科学基金（）；
湖南省当然科学基金（JJ）
ORIGINALARTICLES
本研讨拟评估压制Ras关连的C3肉毒素底物1（Rac1）表白对高糖引发神经元损伤的影响，为明白机制供给根据。
1材料与法子
对数成长久PC12细胞接种于6孔板，采取随机数字表法将细胞分为4组（每组3孔）：一般浓度葡萄糖组（C组）、高浓度葡萄糖组（HG组）、高浓度葡萄糖+慢病毒压制Rac1组（HG+shRac1组）、高浓度葡萄糖+慢病毒阴性对比组（HG+NC组）。C组以葡萄糖浓度为4.5g/L的DMEM全面培育基培育PC12细胞24h，HG组以葡萄糖浓度为45g/L的DMEM全面培育基培育PC12细胞24h，HG+shRac1组以葡萄糖浓度为45g/L的DMEM全面培育基培育用Rac1shRNA慢病毒载体转染的PC12细胞24h，HG+NC组以葡萄糖浓度为45g/L的DMEM全面培育基培育用阴性慢病毒载体转染的PC12细胞24h。
Westernblot法探测微管关连卵白1轻链3（LC3）Ⅰ、LC3Ⅱ、Bcl?2/腺病毒E1B彼此效用卵白３（BNIP3）和p62卵白程度，并策画LC3Ⅱ/LC3Ⅰ；CCK?8法探测细胞生气；流式细胞术探测细胞凋亡率；二氢溴化乙啶法探测细胞活性氧（ROS）程度；荧光定量PCR法探测自噬关连基因7（Atg7）、三磷酸腺苷酶6（ATPase6）和60S核糖体卵白L13（Rpl13）相对表白量，并策画ATPase6/Rpl13。
2结局
2.1 4组PC12细胞ROS程度、细胞生气、凋亡率对比
与C组对比，HG组ROS程度（t=?20.9，P0.）和细胞凋亡率（t=?12.8，P0.）抬高，细胞生气（t=29.5，P0.）下落；HG+NC组ROS程度（t=?30.5，P0.）和细胞凋亡率（t=?22.8，P0.）抬高，细胞生气（t=14.6，P0.）下落；与HG+NC组对比，HG+shRac1组ROS程度（t=5.83，P=0.）和细胞凋亡率（t=6.25，P=0.）低沉，细胞生气（t=?6.11，P=0.）抬高。见表1。
2.2 4组PC12细胞ATPase6/Rpl13、Atg7相对表白量对比
与HG+NC组对比，HG+shRac1组ATPase6/Rpl13低沉（P0.05），Atg7相对表白量抬高（P0.05）。见图1。
2.3 4组PC12细胞BNIP3、p62卵白程度及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ对比
与HG+NC组对比，HG+shRac1组BNIP3卵白程度抬高（P0.05），p62卵白程度低沉（P0.05），LC3Ⅱ/LC3Ⅰ抬高（P0.05）。见图2。
3商议
高糖细胞损伤是摹拟高血糖神经元损伤的细胞模子。预测验结局提醒随葡萄糖浓度抬高，PC12细胞生气逐步下落，PC12细胞在操纵浓度为45g/L的葡萄糖解决24h后，细胞生气被压制近40%。其它，为了清除高浸透压的效用，预测验中咱们在一般浓度葡萄糖组（含葡萄糖4.5g/L）的DMEM培育基增加适当甘霖醇，使其终究形成的浸透压与45g/L葡萄糖相当，解决PC12细胞24h后觉察其细胞生气与一般浓度葡萄糖组对比差别无统计学意义。故细胞测验中HG组采取葡萄糖浓度为45g/L的DMEM全面培育基培育24h。
本研讨结局讲明，HG组较C组细胞生气下落，ROS程度和细胞凋亡率抬高，提醒高糖可引发神经元损伤。HG+shRac1组较HG+NC组ROS程度和细胞凋亡率低沉，细胞生气抬高，Atg7和BNIP3卵白程度抬高，p62卵白程度低沉，LC3Ⅱ/LC3Ⅰ抬高，ATPase6/Rpl13低沉，提醒压制Rac1可加重高糖引发的神经元损伤，其机制也许与坚固线粒体自噬关连。
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